10X 单细胞ATAC-结果展示-南宫28NG相信品牌力量
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    单细胞测序

    1.原始数据预处理

    TAC进行基本的数据分析,主要结果包括:测序数据的产出和质量统计、参考基因组比对情况、实验捕获的细胞数目统计、细胞的fragments统计、fragments的基因组特征区域分布等。 基于Cell Ranger A

    2.差异Peak分析

    将每个cluster和剩余所有cluster之间进行差异可接近性比较,可以找到每个cluster特有的开放区域。

    3.Peak注释

    为研究 TSS 侧翼的开放性程度,我们根据其与 peak 的距离,统计TSS临近区域的peak分布情况;后续使用ChIPseeker 对 peak 在基因组不同功能区域(promoter、5’UTR、3’UTR、 Exon、Intron、Downstream、Intergenic)上的分布进行注释和统计。

    4.聚类分析

    基于ATAC的peak信号,可对细胞进行聚类分析,然后通过t-SNE对样本进行降维、可视化,展示细胞的分群情况[1]

    5.Maker基因展示

    通过聚类分析得到的各cluster中差异高表达的基因,针对这些特征性marker基因以多种形式进行展示[2]

    6.Motif注释分析

    将鉴定到的染色质开放位点同转录因子数据库JASPAR关联,可对cluster的每个Motif进行注释,然后把Motif注释结果投射到t-SNE细胞分群图。可以把cluster差异motif,在t-SNE分群图中可视化,展示Motif活性信号[3]

    7.10x 单细胞转录组和10x ATAC联合分析

    使用FindTransferAnchors鉴定scATAC-seq数据集和scRNA-seq数据集的锚点进行整合分析[4]

    参考文献

    [1] Chen X, Miragaia R J, Natarajan KN, et al. A rapid and robust method for single cell chromatin accessibility profiling[J]. Nature Communications, 2018.
    [2] Pervolarakis N, Sun P, Gutierrez G, et al. Iisntegrated single-cell transcriptomics and chromatin accessibility analysis reveals novel regulators of mammary epithelial cell identity[J]. Cell Reports,2019.
    [3] Cusanovich D A,Hill A J, Aghamirzaie D, et al. Single-Cell Atlas of In Vivo Mammalian Chromatin Accessibility[J]. Cell, 2018, 147(5): 1309-1324.
    [4] Long, Zhilin et al.“Single-cell multiomics analysis reveals regulatory programs in clear cell renal cell carcinoma.”Cell discovery vol. 8,1 68. 19 Jul. 2022.

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