1. 送样标准

• 1.1 定性蛋白质组

  样本类型	送样建议
  胶条样本	方案一：蛋白溶液跑SDS-PAGE胶后，进行染色（建议考染）。 将整个泳道按照轻重链切成五份，轻链重链合并为一个样本，剩下的三个样本作为独立样本，此方案鉴定到目标蛋白的概率最高。 注：此方案相当于4个独立的样本。费用相当于4份。
  	方案二：蛋白溶液跑SDS-PAGE胶后，不跑完整个泳道，在样本跑出分离胶1cm后停止电泳，进行染色（建议考染），切胶送样。送考马斯亮蓝染色或银染后的胶点/胶条，要求条带清晰，无降解，面积1cm2（面积超过要加收费用）。4℃保存，放入EP管中，加入去离子水浸泡，冰袋寄送。 注：考马斯亮蓝染色的条带鉴定到目标蛋白的概率高于银染。
  蛋白溶液	必须提供溶液成分或详细样本处理过程及试剂，蛋白总量为50μg以上。标注浓度、体积；尽量提供胶图。浓度建议>1ug/ul。
  加Loading buffer煮过的蛋白	蛋白总量需在50μg以上。标注浓度、体积；尽量提供胶图。浓度建议>1ug/ul。
  Beads	若有溶液，请备注溶液环境；若无溶液，直接送样即可。干冰寄送。
  注：定性项目多用于互相作用谱（IP／Co-IP／Pull-down）类样本。

  
  

• 1.2定量蛋白质组（外泌体）

  样本来源	Label-free		外泌体鉴定
  	超速离心		透射电镜	粒径及浓度	流式检测（1个指标）		WB检测（1个指标）
  血清/血浆	5ml		0.5mL	0.5mL	0.5mL		1mL
  细胞上清	100ml		10mL	10mL	10mL		20mL
  尿液	100mL		10mL	10mL	10mL		20mL
  唾液	15mL		2ml	2ml	2mL		4mL
  脑脊液	15mL		2ml	2ml	2mL		4mL
  羊水	15mL		5ml	5ml	5mL		10mL
  精液	10mL		0.5mL	0.5mL	1mL		1mL
  胆汁	15mL		0.5mL	0.5mL	1mL		1mL
  腹水	30mL		5mL	5mL	5mL		10mL
  乳液	50mL		2ml	2ml	2mL		4mL
  卵泡液	15mL		2ml	2ml	4mL		8mL
  外泌体	100 μg /1×1012个		15μL	15μL	15μL		15μL

  * 超速离心法分离的外泌体根据样本量可执行Label-free或DIA技术。
  * 分离外泌体前的样本不能加入任何RNA保护剂（如Trizol）。
  * 默认外泌体浓度>10^9个/mL
  * WB检测和流式检测适用物种限：人、大鼠和小鼠；（其余物种样本如有相应需求，需明确告知客户抗体与物种不匹配，有检测不到信号的风险）。

• 1.3 定量蛋白质组

  样本类型			Deep DIA/ Rapid DIA/iPRM	Label-free	iTRAQ/TMT	DIA	PRM
  动物 组织	常规组织（脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉等）		10mg	10mg	10mg	10mg	10mg
  	坚硬组织（软骨、毛发）		200mg	200mg	400mg	200mg	400mg
  植物组织	柔软组织（木本植物的叶、花等，草本植物，藻类， 蕨类植物		100mg	100mg	150mg	150mg	150mg
  	坚硬组织（树根、树皮、树枝等）		1g	1g	2g	1g	2g
  	果肉		2g	2g	4g	2g	4g
  	种子		100mg	100mg	150mg	150mg	150mg
  	花粉		50μl	50μl	100μl	100μl	100μl
  微生物	常见细菌		30mg或30μl沉淀	30mg或30μl沉淀	50mg或50μl沉淀	50mg或50μl沉淀	50mg或50μl沉淀
  	真菌菌体		50mg或50μl沉淀	50mg或50μl沉淀	100mg或100μl沉淀	100mg或100μl沉淀	100mg或100μl沉淀
  宏蛋白质组	粪便、淤泥、发酵物等，样本差异较大，建议尽可能多送		/	10g	/	20g	/
  细胞	悬浮/贴壁培养细胞（因为细胞大小不一，重点是必须达到要求的体积）		2×106(10μL细胞沉淀）	2×106(10μL细胞沉淀）	4×106(20μL细胞沉淀）	4×106(20μL细胞沉淀）	4×106(20μL细胞沉淀）
  体液类（大部分体液含高丰度蛋白，需送原液，不要稀释）	血浆/血清	不去除高丰度	5μl	5μl	5μl	5μl（大于10个样本）	5μl
  		NP磁珠去高丰度	100μl	100μl	200μl	100μl（大于10个样本）	200μl
  		试剂盒人血去除高丰度	10μl	10μl	10μl	10μl（大于10个样本）	10μl
  		试剂盒其他物种血去高丰度	100μl	100μl	200μl	100μl（大于10个样本）	200μl
  	脑脊液/精液/卵泡液		500μL	500μL	1ml	500μL	1ml
  	尿液		10ml	10ml	15mL	15mL	15mL
  	唾液/泪液		500μL	500μL	1ml	500μL	1mL
  	乳汁		10μl	10μl	20μl	10μl	20mL
  蛋白类（需提供溶剂热缓冲液试剂成分）	培养基上清-原液（此类样本通常蛋白浓度较低，建议浓缩后送样）		10ml	10ml	15ml	15ml	15ml
  	提取的蛋白样本（样本纯化前需定量、跑胶）	不含去垢剂类蛋白（最佳 buffer是6MUrea，建议浓度≥0.5μg/μl）	100μg	100μg	150μg	100μg	150μg
  		含去垢剂类蛋白(含 SDS，tritonX-100，NP40，CHAPS 等去垢剂，建议浓度≥0.5μg/μl)	200μg	200μg	300μg	200μg	300μg
  FFPE	每片厚度10μm，组织面积1cm2（约10ug/片）		/	5片	10片	5片	10片

• 组织重量参照
  参照大小	名称	重量
  	黄豆粒	100mg/粒
  	绿豆粒	50mg/粒
  	大米粒	10mg/粒

  
  
﹡建议客户送样时均按照上述送样量送样以保证项目顺利执行； 若低于送样量送样，需后台评估并向客户说明系列风险。
﹡样本类型为蛋白溶液或者蛋白干粉时，需提供SDS-PAGE电泳图及定量结果，用于确认蛋白提取效果；若其缓冲液中含有去垢剂或者蛋白溶液的浓度低于0.5ug/ul，则需要对蛋白进行纯化/浓缩，纯化/浓缩过程中会损失部分蛋白，因此送样量需要大幅提高。
﹡体液类样本普遍蛋白含量较低，尽量推荐不要进行稀释，尽量送原液
﹡纳米磁珠（NP）富集方法即HD blood Plus产品，建议3个月以内采集的新鲜血浆样本，避免溶血。
﹡微量蛋白质组只接收细胞或组织样本，细胞送样量为100-105个细胞（需提供细胞计数结果），组织最低送样量1 mg（芝麻粒大小）。样品尽可能采用低吸附离心管保存，运输时采用封口膜密封离心管，离心管上标记清楚样品名称。默认一次用尽，为节省样本量，实验过程中不做蛋白定量及SDS-PAGE检测。
具体样本类型送样建议详见下表：

• 样品类型		建议送样量	样本预处理及保存
  细胞类	悬浮型原代细胞	100-105cells	1)400-1000 g离心10 min收获细胞，弃上清。 2)用预冷的PBS小心洗涤片状沉淀物2次，置于冰上。 3)低速离心去除上清，液氮速冻，-80℃保存。
  	贴壁型原代细胞	100-105cells	弃掉培养液，并将培养皿倒置于吸水纸上吸干培养液，刮取细胞至离心管中，建议送样量≥ 1000个细胞，-80℃保存。
  	分选的某类细胞	100-105cells	收集分选后的样本，原管保存，400 g-1000 g离心10 min收获细胞，建议送样量≥ 1000个细胞，-80℃保存。
  组织类	临床活检穿刺组织	≥1mg	离体后PBS清洗血液，建议送样量≥1mg，-80℃保存。

• 1.4 修饰蛋白质组

  样本类型		磷酸化（label free/DIA/Deep DIA）	标记磷酸化（TMT）	酰化/泛素化/甲基化	标记乙酰化（TMT）	N-/O-糖基化*	组蛋白修饰
  动物组织	常规组织（脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉等）	100mg	50mg	1g	200mg	100mg	100mg
  	坚硬组织（软骨、毛发）	2g	1g	10g	4g	2g	1g
  植物组织	柔软组织（木本植物的叶、花等，草本植物，藻类，蕨类植物）	500mg	250mg	10g	1g	500mg	1g
  	坚硬组织（树根、树皮、树枝等）	10g	5g	50g	20g	10g	5g
  	果肉	20g	10g	100g	40g	20g	/
  	种子	4g	2g	20g	8g	4g	/
  	花粉	400μl	200μl	2ml	800μl	400μl	400μl
  微生物	常见细菌、真菌菌体	200mg或200μl沉淀	100mg或100μL沉淀	1g或1mL沉淀	400mg或400μl沉淀	/	150mg或150μl沉淀
  细胞	悬浮/贴壁培养细胞（因为细胞大小不一，重点是必须达到要求的体积）	1×107(50μl细胞沉淀)	5×106(30μl细胞沉淀)	1×108(500μl细胞沉淀)	2×107(100μl细胞沉淀)	1×107(50μl细胞沉淀)	1×107(50μl细胞沉淀)
  液体类	血浆/血清（不去高丰度）	50μl	20μl	500μl	100μl	50μL	/
  	唾液/泪液	2mL	1ml	5mL	4ml	2mL	/
  其他	不含去垢剂类蛋白（最佳buffer是6MUrea，建议浓度≥0.5μg/μl）	500μg	200μg	10mg	600μg	800μg	60μg
  	含去垢剂类蛋白(含SDS，,tritonX-100，NP40，CHAPS等去垢剂，建议浓度≥0.5μg/μl)	1mg	800μg	20mg	1.2mg	1.6mg	/

  ﹡建议客户送样时均按照上述送样量送样以保证项目顺利执行；若低于送样量送样，需后台评估并向客户说明系列风险。
  ﹡酰化修饰包括乙酰化、琥珀酰化、丙酰化、丙二酰化、戊二酰化；甲基化包括精氨酸单甲基化、赖氨酸泛甲基化。
  ﹡组蛋白修饰理论上适用于所有真核生物及其相应组织细胞等，其修饰包含磷酸化、甲基化（单甲基化、二甲基化、三甲基化等）、酰化（乙酰化、丙二酰化、丁酰化、戊二酰化、琥珀酰化、巴豆酰化）等；组蛋白修饰只接收未经处理的样品或纯组蛋白，不接收半加工的样品，尤其是加入裂解液或提取出总蛋白的样品。
  ﹡样本类型为蛋白溶液或者蛋白干粉时，需提供SDS-PAGE电泳图及定量结果，用于确认蛋白提取效果；若其缓冲液中含有去垢剂或者蛋白溶液的浓度低于 0.5ug/ul，则需要对蛋白进行纯化/浓缩，纯化/浓缩过程中会损失部分蛋白，因此送样量需要大幅提高。
  ﹡糖基化修饰物种类型只可以接人、大小鼠、植物，若有其他物种需求，请联系对应产品经理。

2.样本预处理及保存

• 2.1动物组织样本

  （1）常规动物组织(脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉等)
      1）根据研究目的取特定部位组织，如果组织上有血液残留，用预冷的生理盐水/PBS将其清洗干净；
      2）将组织剪切成长0.5cm小块或100mg左右的小块装入EP管中；
      3）注明组织具体部位，做好标记，液氮速冻5min以上，-80℃保存，避免反复冻融。
  （2）软体动物 (血吸虫、旋毛虫等)
      1）收集样本，用预冷的PBS去除污染物；
      2）做好标记，液氮速冻5 min以上，-80℃保存，避免反复冻融。
  （3）动物坚韧组织（软骨、毛发等）
      1）根据研究目的取特定部位组织，去除非目标组织，并用预冷的PBS洗去附着物；
      2）注明组织具体部位，做好标记，液氮速冻5min以上，-80℃保存，避免反复冻融。

• 2.2植物组织样本

  （1）植物的叶、花、果实、种子、树根、树皮等及蕨类等
      1）根据研究目的取特定部位组织，去除非目标组织，取样后用预冷的PBS清洗2-3遍，去除杂质；
      2）注明组织具体部位，做好标记后液氮速冻5min以上，-80℃保存，避免反复冻融。
  （2）花粉
  开花期收集花粉，在显微镜下检查花粉并去除杂质，转入EP管内，液氮速冻，-80℃保存。
  （3）藻类组织
  根据不同的藻类采取合适的离心力，分离藻类同时保证细胞完整，PBS洗涤2-3次，液氮速冻，-80℃保存。

• 2.3 微生物样本

      1）采用离心法收集菌体，用预冷的PBS快速冲洗2-3次，避免培养基蛋白对菌的污染；
      2）每次清洗后4℃，5000g离心5min将上清完全弃去，菌体收集在1.5mL进口离心管（冻存管）中，记录菌体积，液氮速冻后，-80℃冰箱保存。

• 2.4 细胞样本

  （1）悬浮细胞
      1）400-1000g，离心5-10min收集悬浮细胞，弃上清；
      2）用预冷的PBS溶液洗2-3遍，离心弃上清，收集细胞于1.5ml离心管中；
      3）建议每个样品至少 2-3 管，每管细胞体积大于 50μl，记录细胞体积，液氮速冻后，-80℃冰箱保存。
  （2）贴壁细胞
      1）培养好的细胞去除培养基，用预冷的PBS溶液清洗细胞表面2-3遍；
      2）将含细胞的培养皿置于冰上，加入0.5ml 裂解液（6M 尿素，0.1MTEAB），轻轻摇晃培养皿，用细胞刮将细胞刮下，吸取细胞和裂解液到1.5mL离心管；3）建议每个样品至少2-3管，每管细胞体积大于50 μl。记录细胞体积，液氮速冻后，-80℃冰箱保存。
  注：
      1）裂解液使用前加入蛋白酶抑制剂（如有条件；Roche，货号：5892791001）；如果进行磷酸化检测，裂解液中需加入磷酸酶抑制剂（Roche，货号：4906845001）。
      2）若无此裂解液，也可按照贴壁细胞传代流程，采用胰酶酶解使贴壁细胞脱落，用预冷的PBS溶液清洗细胞2-3遍，再送样。

• 2.5 液体样本

  （1）血浆
      1）使用EDTA抗凝管（紫色头盖）采集血液样本，轻轻地上下颠倒混匀8-10次， 立即4℃，800g离心10min；
      2）用移液器将上层血浆转移至进口1.5ml离心管中，立即添加蛋白酶抑制剂混匀 (如有条件)，液氮速冻，-80℃冰箱保存。
  （2）血清
      1）收集全血至不含抗凝剂的离心管或真空采血管（红色头盖）中，4℃静置15-30min进行凝固分层，4℃，800 g离心10min（为保证血清质量可再离心一次）；
      2）用移液器将血清转移至进口1.5ml离心管中，立即添加蛋白酶抑制剂混匀(如有条件)，液氮速冻，-80℃冰箱保存。
  注：
      1）血清/血浆样品制备过程中不能溶血，可能出现溶血的原因有：穿刺时消毒的碘或酒精没有完全干透；采血过程对静脉血管过多冲击；摇匀力度太大；抗凝标本摇匀不足；标本保存运送过程温度太高或太低；取血的胳膊同时也在输液；用留置针输液，拔出后马上取血；患者服用消炎药物（如阿司匹林）等。
  对于溶血建议解决方法：专业采血人员进行采血；轻柔摇动混匀；上下摇动十次以上；尽量避开治疗和服用特殊药物时采血。
  血样比色卡     2）如果血浆样本需要去除高丰度蛋白或制备外泌体，在收集样本时不能使用肝素抗凝剂，只能使用EDTA等其他抗凝剂。
      3）血清参考得率：30%~50%（例如：1mL全血大约能得 0.3~0.5mL血清）；血浆参考得率：约50%（例如：1mL全血大约能得0.5mL血浆）。
      4）对于做HDBloodPlus需NP富集的，建议送在3个月以内采集的血浆样本，越新鲜越好。
  （3）唾液
      1）取样前禁食2h以上，上午9-12点取样最佳，将唾液外吐于无菌痰杯内（保持冰浴），不要咳痰，短时间内收集足量样本；
      2）1000g-2000g离心5min , 取上清于1.5ml离心管(或使用0.22μm滤膜过滤)，液氮速冻，-80℃保存。
  （4）泪液
  使用毛细管微量移液管收集样品于进口离心管，4℃，8000-14000 g，离心5min，取上清于1.5ml离心管内，液氮速冻，-80℃保存。
  （5）尿液
      1）采集受试者晨起或晨间1h的中/后段“新鲜”尿液，于4℃临时保存（不得超过 8 h），注意避免细菌污染，收集前注意对饮食的控制；
      2）4℃，3000g离心15min，去除细胞或细胞碎片，液氮速冻15min，-80℃冰箱保存，足量干冰寄送。
  （6）乳汁
  收集乳汁于离心管中，液氮速冻，-80℃冻存。
  （7）脑脊液/关节液/淋巴液/腹水/胸水等
      1）收集体液并立即置于冰上，避免血液污染。
      2）4℃，2000g，离心10-15min，去除细胞或者细胞碎片等。
      3）取上清分装到离心管中，液氮速冻，-80℃冻存。
  （8）羊水
      1）羊膜穿刺法取羊水。
      2）4℃，10000g离心15min，去除细胞及细胞碎片。
      3）将上清立即转移至新的1.5ml离心管中，液氮速冻，-80℃冻存。。
  （9）细菌培养上清液
      1）细菌培养一段时间后，根据实验设计或细菌培养状态选择合适时间收集细菌上清。
      2）4℃，10000g，离心10-15min去除细菌，取上清分装到离心管中，液氮速冻，-80℃冻存。
  （10）细胞培养上清液
      1）培养细胞去除旧培养基，用PBS清洗2-3遍，然后加入无血清培养基继续培养一段时间。
      2）根据实验设计或细胞培养状态选择合适时间收集细胞上清。
      3）4℃，1000g，离心10min去除细胞，收集上清。
      4）4℃，10000g，离心10min去掉细胞碎片，取上清分装到离心管中，液氮速冻，-80℃冻存。
  注:
      1）收集细胞上清液前，细胞培养基必须使用无血清培养基，避免血清干扰；
      2）细胞需无衣原体、支原体及其他微生物污染，否则可能会影响后续数据质量。

• 2.6 其它

  （1）蛋白溶液
  请提供蛋白提取方法及溶解缓冲液信息，裂解液可以用6M尿素含0.1-1%SDS；其他溶解缓冲液可以使用纯水或PBS，如使用其他buffer请提前咨询是否兼容, 并填写到送样单上。
  （2）组蛋白沉淀或溶液
  收集组蛋白沉淀或将组蛋白溶于40μLpH为8.0的50mM的NH4HCO3溶液中，-80℃冻存；请提供组蛋白提取方法，且如果使用其他溶解buffer时，请提前咨询是否兼容, 并填写到送样单上。
  （3）外泌体
      1）外泌体得率：处于不同发育阶段以及不同生长条件的样本中所含有的外泌体的量不同，在某些实验条件下或某些病变部位获得的样本中外泌体的量可能与常规相应样本有显著的差异；
      2）储存条件以及储存时间影响外泌体得率，一般从新鲜的样本中能够得到预期的外泌体产。即使保存在-80℃冰箱中的样本，如果储存时间过长，外泌体产量也会显著降低。
      3）样本采集后，样本迅速放入进口高质量冻存管中，拧紧后立即到-80℃中保存。细胞上清样本处理后储存于-80℃冰箱中。在-20℃冰箱中储存不宜超过1个月。
      4）提取好的外泌体保存：对于一些功能性实验，建议直接使用新鲜提取或保存在4℃悬浮于PBS中，注意保存液中不能含有去污剂成分。4℃保存不超过一周，对于长期保存用于治疗应用的外泌体，-80℃存储条件将更可取。
  （4）蛇、蝎毒液等（干重）
      1）一般分为2种方法，可根据自身实验条件进行选择：
      2）真空干燥（减压干燥）：低压下使蝎毒液中的水分快速蒸发，蝎毒干燥后，应缓缓旋开活塞，以防止空气冲散。取出干粉，立即分装，密封低温保存。
      3）真空冷冻干燥：先将蝎毒液在低温冰柜中预冻成固体，然后使用冷冻干燥机进行干燥和低温保存。由于冷冻干燥是在低温和高真空下进行的，所以毒液在冻干过程中不起泡、不沾壁、疏松、易取出、易溶于水、有利于保存。
      4）干蛇毒必须避光包装保存，放置阴凉地方或冰箱内冷藏。
  （5）发酵液
  4℃，10000-20000rpm离心30-60min（或使用0.22μm滤膜过滤），取上清；液氮速冻5min，保存于-80℃。

3. 注意事项

4.附件1《人间传染的病原微生物名录》