基因组测序>
建库测序>
人类基因组测序>
动植物基因组测序>
微生物基因组测序>
转录调控测序>
表观组测序>
单细胞测序>
空间转录组>
基因分型>
质谱分析>
蛋白组学分析>
代谢组学分析>
免疫定量>
多组学联合分析>
分子育种>
基因合成>
建库流程
DNA样品检测合格后,使用Covaris超声波破碎仪随机打断,再经末端修复、加A尾、加测序接头、纯化、PCR扩增等步骤完 成整个文库制备工作。测序质量分布检查
测序质量说明了测序错误率的多少,测序错误率越低表明测序质量较高。测序错误率分布检查
测序错误率是影响碱基测序质量的因素之一。根据Illumina测序平台的技术特点,测 序片段(reads)前端几个bp以及片段末端的错误率会偏高。GC含量分布检查
GC含量分布检查用于检测有无AT、GC分离现象。鉴于序列的随机性打断和G/C、A/T含量分别相 等的原则,理论上每个测序循环上的GC及AT含量应分别相等,且在整个测序过程基本稳定不变,呈水平线,而N含量也反映了测序质量的好坏。测序数据过滤
测序得到的原始测序序列(Sequenced Reads)或者 raw reads,里面含有部分带接头或低质量的reads。为了保证信息分析质 量,对raw reads进行过滤,得到过滤后的数据即为clean reads,后续分析都基于clean reads。测序数据质量汇总
测序数据质量是评估测序结果的好坏是后续数据分析的基础。 Novaseq结果展示:Sample | Raw Base(bp) | Clean Base(bp) | Effective Rate(%) | Error Rate(%) | Q30(%) |
---|---|---|---|---|---|
Nova001 | 48,489,166 | 48,347,720 | 99.71 | 0.03 | 92.59 |
Nova002 | 50,864,185 | 50,672,933 | 99.62 | 0.02 | 93.26 |
Sample | Raw Base(bp) | Clean Base(bp) | Effective Rate(%) | Error Rate(%) | Q30(%) |
---|---|---|---|---|---|
X001-L1 | 24,894,052 | 24,670,847 | 99.10 | 0.03 | 92.53 |
X002-L5 | 24,010,638 | 23,764,677 | 98.98 | 0.03 | 92.80 |
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